Taq-Klenow聚合酶

Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立于1998年，是為生命科學界提供基因組研究耗材和服務的先進者。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和試劑，專注于代以及新一代測序和DNA段分析。我們提供大量分子生物學相關產品，包括抗體，生化試劑，克隆試劑盒，酶，PCR試劑盒，蛋白質凝膠和溶液等。作為我們自己的制造商，我們可以控制生產流程，并大限度地減少定制和大規模訂單的延遲。它有助于確保我們的客戶獲得高質量和價值。

MCLAB擁有一支由20 多位經驗豐富的科學家組成的團隊，致力于為研究人員提供的服務。我們專注于基因組學領域，擁有DNA測序，發酵，片段分析，分子克隆，過表達，蛋白質純化和蛋白質合成方面的專家。我們采用量身定制的客戶服務方式，讓您有機會定制您的項目，并直接與我們的科學家團隊交流以獲得技術支持。憑借二十多年的經驗，我們才華橫溢，技術的員工致力于為您提供所需的成果。

Taq-Klenow聚合酶

Taq- Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq DNA聚合酶修飾，分子量為61kDa。

描述：
Taq -Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq- Klenow 修飾，分子量為61kDa。與常規Taq- Klenow 相比，這種截短形式缺乏5' - > 3'外切核酸酶活性，但更具熱穩定性，并且在PCR擴增中具有更高的保真度。

應用：
- PCR（普通和高通量）
- 引物延伸
- 微陣列分析
- 變性液相色譜（DHPLC）

來源：攜帶來自嗜熱生物Thermus Aquaticus YT-1 的Taq- Klenow基因的
重組大腸桿菌菌株。

供應：
10x Taq PCR Buffer（無dNTP）

提供：
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
穩定劑
50％甘油
pH 7.5 @ 25°C 

單位定義：
1單位定義為酶量將在75℃下在30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性材料中。

PCR指南：
Taq -Klenow是初和常用的PCR酶。Taq酶擅長于從低復雜性模板來源擴增較短（<5kb）的序列，并且在很少或沒有優化反應條件的情況下產生穩健的產率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶設計PCR策略時，請考慮以下指南。

1. DNA模板：盡管通常不需要對PCR模板進行大量純化，但應注意粗制或部分純化的DNA來源，因為處理和化學試劑會對PCR過程產生不利影響。應避免接觸短波紫外線或其他DNA損傷劑，高離子強度，SDS，加載染料和苯酚等清潔劑也應避免接觸。為了防止以前的PCR反應造成污染，請考慮在正壓罩和氣溶膠屏障吸管設置反應。在典型的25個循環PCR中，104個拷貝的靶序列將產生可重復的擴增產物。這相當于大約0.1-1ng / ml（終濃度）的質粒DNA和1-10μg/ ml的基因組DNA。使用較低的DNA濃度通常會產生較少的非特異性產物，

2.引物設計：理想地，寡核苷酸引物長度為15-30個堿基，接近50％G + C，并具有相等的（+/- 3℃）退火溫度。建議使用軟件來檢測自身互補或發夾易發區域，并由一些綜合提供商提供服務。注意，雖然引物的5'末端可能包含未模板序列，但3'末端必須*匹配。反應中典型的寡核苷酸濃度為0.1-0.5μM。

3.鎂：鎂是PCR反應的關鍵組成部分，盡管其濃度可以調節以促進各種效應。通常，1.5-2.0mM Mg ²⁺靶向，但更高的濃度（高達5mM）可用于以保真度為代價刺激反應的產率。相反的情況也是如此 - 較低的鎂濃度將促進更高保真度的產品，總體擴增產率更低。注意，某些反應組分，特別是模板DNA和寡核苷酸，可能為反應提供螯合劑，這會降低有效的鎂濃度并使反應餓死。

4. dNTP：通常，使用100-200μMdNTP的終濃度，盡管更高的濃度可以刺激產量（特別是對于更長的靶標）并且更低的可以提供保真度的增加。Taq酶DSC 2.0 DNA聚合酶還可以摻入和讀取脫氧尿苷和肌苷，這兩種類似物在某些應用中使用。

5. Taq DSC 2.0聚合酶：典型的是1單位/50μL反應（20U / mL），但可以添加額外的酶以刺激產率。Taq DSC 2.0 DNA聚合酶以大約1-2000個核苷酸/分鐘擴展DNA模板，因此建議每個循環每個kb應提供30-60秒的延伸時間。適當的延伸溫度范圍為68-72°C。因為Taq DSC 2.0 DNA聚合酶利用DNA聚合酶對雙鏈DNA段的天然親和力來促進其熱啟動功能，所以它不需要廣泛的初始變性步驟來激活聚合酶。

典型的50μl反應：
在冰上，準備以下每種主混合物，合并，并置于加熱（至94°C）熱循環儀中：

2x DNA /寡核苷酸主混合物：
1.0μl10mM 
dNTPs1.0μl10μMFrontPrimer 
1.0微升10μM反向引物
1.0微升500納克/微升基因組DNA 
21微升I型水

2X酶/緩沖液預混：
5.0微升10X 的Taq PCR緩沖液（無的dNTP）
0.2微升5單位/微升的Taq DSC 2.0 DNA聚合酶
19.8微升I型水

推薦儲存條件： -20°C

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