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      利用Transcreener CD73檢測發現新型抑制劑

       更新時間:2020-12-29 點擊量:1826

       

       

      bellbrooklabs利用Transcreener CD73檢測發現新型抑制劑

      Transcreener CD73檢測可測量由ecto-5'-核苷酸酶(也稱為5'-核苷酸酶,NT5E,分化簇73或CD73)產生的腺苷(ADO)。通過測量ADO的產量,研究人員可以有效地確定該酶的活性。該測定法為篩選CD73調節劑的整個化合物文庫提供了強大的工具,以幫助尋找疾病的新療法,例如癌癥。

      該測定法使用偶聯酶,該偶聯酶使用CD73產生的ADO產生產物AMP和ADP。然后可以使用受信任的TranscreenerADP²分析組件來測量ADP。該試劑盒配有測量活性所需的所有檢測試劑。抑制劑篩選測定試劑盒中不包括CD73酶。

      CD73是嘌呤能信號傳導的重要信使

      外源核苷酸是與細胞膜結合的酶,具有外部定向的活性位點,可將核苷酸代謝為核苷,對于維持免疫穩態至關重要。CD39將ATP和ADP水解為AMP。CD73將AMP進一步加工成腺苷,從而對許多疾病產生重大影響。近的研究表明,腺苷在腫瘤微環境中的免疫抑制中起著關鍵作用,而外切核苷酸酶正成為有希望的免疫腫瘤學靶標。了解更多有關使用TranscreenerAMP²測定法靶向CD39的信息。

      嘌呤能信號

      檢測腺苷以測量CD73的酶活性

       
      Transcreener CD73檢測示意圖
       
       

       

       

       

      查看預先錄制的網絡研討會-Transcreener CD73分析:利用核苷酸檢測來測量腺苷

      這次演講的重點 是在基礎研究和藥物發現中使用Transcreener®ADP 2分析法測量腺苷。涵蓋的主題包括:

      • 開發用于測量CD73酶活性的偶聯測定
      • 建立高通量篩選條件
      • 設置屏幕
      • 運行劑量響應曲線,重點是數據分析
       

      應用領域

      • 測量CD73的酶活性
      • 篩選CD73抑制劑的復合文庫
      • 量化抑制劑效能(IC 50)
      • 抑制劑選擇性分析

      特征

      • 未標記腺苷的檢測
      • 易于使用,同質,一步式
      • 初始速度條件下的穩健分析Z'> 0.7
      • 遠紅外熒光讀數程度地減少了化合物干擾
      • 一種安全的非放射性方法

      易于使用,混合閱讀,HTS就緒分析

      Transcreener CD73測定法采用易于HTS使用的混合讀取格式。運行您的酶反應,添加Transcreener試劑,然后閱讀板。該測定與96、384和1536孔格式兼容。

      初始速度下腺苷的檢測

      當原始數據轉換為使用標準曲線生成的腺苷時,該測定法證明了線性。

      人CD73酶滴定

      CD73酶滴定

      線性響應

      初始速度下的CD73

      抑制劑篩選和執行SAR

      Transcreener Assays設計用于以高通量格式篩選化合物庫。還可以使用該測定法進行隨訪SAR,從而輕松確定抑制劑的效價。

      1600復合先導篩

      CD73先導屏幕

      使用CD73活性測定法篩選了來自Chembridge多樣性庫的子集。該子集的ah率為0.85%,而穩健的Z'為0.81。

      獲取準確的劑量響應測量

      PSB 12379效能CD73

      在存在5 pM CD73的情況下PSB 12379的劑量反應曲線。該數據說明IC 50為19 nM。

      可靠的分析可產生質量數據

      使用優化的CD73反應條件進行的Z'測量表明存在可靠的分析方法。如此強大的數據對于大尺寸的高通量篩選至關重要,由于大量樣品難以完成。

      在主要的多模閱讀器上驗證了遠紅FP讀數

      供應商儀器
      bioteklogoTriStar²SLB 942
      密特拉拉斯LB 943
       
      bioteklogoCytation™5
      Cytation™3
      Cytation™1
      Synergy™H1
      Synergy™2 / H4 / 4
      Synergy™HTX
      Synergy™Neo 2
       
      BMGLABTECH徽標POLARstar ®歐米茄
      FLUOSTAR ®歐米茄
      PHERAstar ® FSX
      PHERAstar ®加/ FS
      CLARIOstar ® /加
       
      MDS AT徽標分析師® GT / HT
      雙子座® XPS / EM
      的SpectraMax ® M2 / M2e的
      的SpectraMax ® M5 /的M5e / FlexStation ® 3
      的SpectraMax ®范式
       
      珀金埃爾默標志的EnVision ® /的EnVision ® XCITE
       
      tecanLogo無限® M1000 / M1000Pro / Safire2™
      無限® M200
      無限® F500
      無限® F200 /超進化
      Spark™10M

      包含什么

       
      零件筆記
      ADP²抗體核苷酸ADP特異的抗體。
      ADP追蹤器替換后,可以以FP分析格式讀取熒光的變化。
      腺苷用于啟動CD73酶促反應并生成AMP / ADO標準曲線。
      安培AMP用于創建ADO / AMP標準曲線,并用作CD73的底物。
      三磷酸腺苷用作偶聯酶的底物。
      耦合酶將ADO傳輸到ADP和AMP,從而允許通過TranscreenerADP²分析組件測量ADP。

      您將需要什么

       
      零件筆記
      CD73酶我們已經成功使用了R&D Systems Cat。公司的純化重組CD73酶。#5795-EN。
      酶緩沖液我們已經成功使用了pH 7.5的50 mM Tris,5 mM MgCl 2,1%DMSO和0.01%Brij-35緩沖液。
      停止解決方案該測定設計為以動力學模式運行。該套件沒有停止解決方案。
      檢測板可以直接通過BellBrook實驗室購買測定板。

       

      FP-需要一個具有非粘合表面的全黑色印版。我們建議使用康寧384孔板Cat。#4514

       

      Transcreener CD73檢測試劑盒

      *對于定制或批量訂單(超過10,000口井),

       
      貨號。產品描述價錢
      3026-1 KTranscreener CD73 FP測定法(1,000測定法,384孔)$ 995
      3026-10KTranscreener CD73 FP測定法(10,000測定法,384孔)$ 5,699

      FP檢測板

       
      貨號。產品描述價錢
      2229康寧384孔黑色檢測板(#4514),3包(1,000多種檢測)$ 45
      2230康寧384孔黑色檢測板(#4514),30包(10,000+檢測)$ 400
       

      CD73檢測服務

      有興趣推進您的程序,但不想內部進行分析嗎?我們的科學家可以提供幫助!BellBrook的科學家將利用其豐富的生物化學和酶學專業知識與您合作,并加快您的CD73程序。

      分析開發服務

      潛在客戶發現服務包括:

      • 抑制劑篩選–識別或確認靶標的活性。
      • 抑制劑效能分析–靶標和/或相關蛋白的劑量反應。快速IC 50結果。
      • 停留時間測量–使用“跳躍稀釋”酶法測定k off。
      • 作用機理研究–動力學分析定義了抑制方式。

       

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