genelink凝膠純化產(chǎn)品簡介

genelink凝膠純化產(chǎn)品簡介

如果應(yīng)用是用于 PCR 或測序，所有短于 40mer 的 Gene Link 寡核苷酸通常不需要任何進(jìn)一步的純化。強(qiáng)烈建議將凝膠純化用于涉及產(chǎn)品克隆的所有應(yīng)用，例如誘變、克隆或基因構(gòu)建應(yīng)用。不建議使用反相柱或 HPLC 純化。

寡核苷酸純化

DNA 的自動化化學(xué)合成得到了迅速改進(jìn)，化學(xué)方面取得了巨大的進(jìn)步，使常規(guī)偶聯(lián)產(chǎn)率超過 99%，并且每個合成周期不到 3 分鐘的自動化非常可靠。在 20-30 聚體范圍內(nèi)獲得的最終寡核苷酸產(chǎn)物基本上是純的，具有非常低的截短序列，因此對于大多數(shù)涉及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR*) 和 DNA 測序的常規(guī)應(yīng)用不需要進(jìn)一步純化。其他應(yīng)用可能需要純化，建議用于克隆、定點(diǎn)誘變、連接等。

寡核苷酸的純化可以通過多種方法完成，根據(jù)具體要求進(jìn)行選擇。可用和經(jīng)常使用的常用技術(shù)是聚丙烯酰胺凝膠純化 (PAGE)、HPLC 和反相柱 (RPC)。下表總結(jié)了上述每種技術(shù)的純化范圍。

聚丙烯酰胺凝膠純化

這種方法的純化被認(rèn)為是寡核苷酸純化的黃金標(biāo)準(zhǔn)。PAGE 純化可用于任何長度的寡核苷酸（與僅限于寡核苷酸的 HPLC 和 RPC 柱相比，優(yōu)選低于 35 聚體）。這種技術(shù)也是勞動強(qiáng)度高的方法。制備適當(dāng)百分比的聚丙烯酰胺凝膠 (10-20%) 并對寡核苷酸進(jìn)行電泳。主要產(chǎn)物是最慢的遷移帶，通過紫外線陰影識別并切除。然后凝膠切片通常通過壓碎和浸泡法進(jìn)行寡核苷酸洗脫處理。

高效液相色譜

HPLC 純化通常基于利用疏水基質(zhì)的反相。寡核苷酸是用三苯甲基 ON（合成寡核苷酸最后一個堿基的 5' OH 處的三苯甲基）合成的，洗脫圖譜首先洗脫所有非三苯甲基化截短序列，然后洗脫疏水結(jié)合的全長寡核苷酸。該方法產(chǎn)生大于 95% 的純度，具體取決于寡核苷酸的序列和長度。基于反相的 HPLC 在 35-40mer 寡核苷酸以上失敗，因為較長的寡核苷酸本質(zhì)上是疏水的并且非特異性結(jié)合。

反相墨盒

這是 HPLC 反相純化的廉價替代品。用于反相純化的小柱通常包含疏水性基質(zhì)，例如 C18 二氧化硅，純化原理與 HPLC 相同，根據(jù)寡核苷酸的序列和長度，純化可達(dá)到約 95% 的純度。基于反相柱的純化在 35-40mer 寡核苷酸以上也失敗，因為較長的寡核苷酸本質(zhì)上是疏水的并且非特異性結(jié)合。

推薦

 如果應(yīng)用是用于 PCR 或測序，所有短于 40mer 的 Gene Link 寡核苷酸通常不需要任何進(jìn)一步的純化。強(qiáng)烈建議將凝膠純化用于涉及產(chǎn)品克隆的所有應(yīng)用，例如誘變、克隆或基因構(gòu)建應(yīng)用。不建議使用反相柱或 HPLC 純化。  

價目單價目表

**聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 過程受保護(hù)

霍夫曼-拉羅氏。使用授權(quán)試劑自動授予執(zhí)行許可。