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      AssayQuant:以熒光團技術,賦能高通量篩選與機制研究

       更新時間:2025-04-16 點擊量:352

      AssayQuant:以熒光團技術,賦能高通量篩選與機制研究

      AssayQuant Technologies專注于開發(fā)激酶和磷酸酶的熒光檢測技術,致力于為生物醫(yī)藥研發(fā)提供高效、精準的解決方案。公司以PhosphoSens技術為核心,通過實時監(jiān)測酶活性反應曲線,突破傳統(tǒng)終點法的局限性,幫助科研人員更深入地理解抑制劑作用機制。

      AssayQuant的產品線覆蓋400余種激酶和磷酸酶檢測試劑盒,以及超30,000種熒光多肽底物,支持從基礎研究到藥物開發(fā)的全流程應用。其技術已在全球范圍內被132篇文獻引用,并與多家國際藥企及研究機構建立合作。

      作為中國市場的戰(zhàn)略布局,AssayQuant自2022年起授權上海起發(fā)實驗試劑有限公司為全國一級代理商,提供本地化技術支持與服務。


      核心優(yōu)勢

      1.PhosphoSens技術

      SOX熒光團:尺寸小(與色氨酸相當)、疏水性低,可直接標記底物多肽,實現連續(xù)熒光信號輸出,避免化合物自身熒光干擾。

      動態(tài)監(jiān)測:每30秒至2分鐘采集數據,實時捕捉酶活性變化,支持動力學參數(如IC50、Ki、kon/koff)計算。

      2.高特異性與生理相關性

      底物基于天然激酶底物序列優(yōu)化,確保實驗結果與體內環(huán)境高度一致,生化實驗與體內研究相關性優(yōu)異。

      3.多功能檢測模式

      連續(xù)熒光檢測:兼容常規(guī)熒光酶標儀,無需額外設備。

      時間分辨熒光(TRF):使用Eu3?替代Mg2?,通過紅移信號(620nm)消除背景干擾,適用于高靈敏度終點檢測。

      4.靈活應用場景

      支持抑制劑效能評估、激酶組分析、高通量篩選(HTS)、脫靶效應研究等,覆蓋腫瘤、免疫、代謝疾病等領域。


      主要產品、技術介紹:

      1.ALK [C1156Y](PhosphoSens Substrate: AQT0101)

      AssayQuant:以熒光團技術,賦能高通量篩選與機制研究

      AssayQuant 的 PhosphoSens 連續(xù)檢測技術 采用簡單的 “添加-讀取"操作流程,支持實時動力學監(jiān)測,僅需通過熒光強度(FI)測量即可完成。

      該技術通過測量反應初始階段(通常為前30-60分鐘)的初始線性區(qū)域斜率,提供高精度和高準確性的 初始反應速率 數據,并以每30秒至2分鐘的頻率采集大量數據點。

      連續(xù)檢測格式 還可通過以下方式校正化合物自熒光干擾:

      背景信號(包含化合物及反應體系中除酶外的所有組分)的熒光信號在反應過程中恒定不變;

      通過從總熒光信號(包含酶及所有反應組分)中減去背景信號,即可計算每個時間點的 凈信號。

      該技術兼容幾乎所有具備 動力學讀板功能 的商用熒光酶標儀及實驗室自動化設備,無需終止反應或顯色步驟,顯著縮短實驗時間并提升通量。


      2.ABL1(PhosphoSens Substrate: AQT0030)

      AssayQuant:以熒光團技術,賦能高通量篩選與機制研究

      由于許多化合物庫含有自熒光化合物,AssayQuant 推出了 PhosphoSens Red 檢測試劑盒,該試劑盒允許在更長波長(>600 nm)下進行檢測,同時保持相同的激發(fā)波長最大值,并采用 時間分辨熒光(TRF) 技術。

      我們建議在激發(fā)光與發(fā)射波長檢測之間設置 100 微秒延遲,并采用 300 微秒采集時間,以避免反應混合物中熒光材料(具有納秒級短壽命)的信號干擾。

      反應完成后,向每個孔中加入基于 銪離子(Eu3+) 的試劑,該試劑會置換螯合復合物中的 Mg2+。Soc 熒光團被激發(fā)后,通過敏化作用增強銪的發(fā)光,產生最大波長為 615 nm(紅色) 的光信號,可通過標準濾光片進行測量。


      3.CDC42BPG(PhosphoSens Substrate: AQT0837)


      AssayQuant:以熒光團技術,賦能高通量篩選與機制研究

      由于許多化合物庫含有自熒光化合物,AssayQuant開發(fā)了PhosphoSens Red檢測技術,該技術允許在更長波長(>600 nm)下進行檢測,同時保持相同的激發(fā)波長最大值,并采用時間分辨熒光(TRF)技術。

      我們建議在激發(fā)光與發(fā)射波長檢測之間設置100微秒延遲,并采用300微秒采集時間,以避免反應混合物中熒光材料(具有納秒級短壽命)的信號污染。

      反應完成后,向每個孔中加入基于銪離子(Eu3?)的試劑,該試劑會置換螯合復合物中的鎂離子(Mg2?)。Sox熒光團的激發(fā)會敏化銪離子的發(fā)光,產生最大波長為615 nm(紅色)的光信號,可通過標準濾光片進行測量。


      目標客戶群體

      生物醫(yī)藥企業(yè):小分子激酶抑制劑研發(fā)、臨床前藥效評價。

      科研機構:癌癥、免疫疾病等領域的酶學機制研究。

      CRO/CDMO:高通量篩選、化合物庫活性評估。

      診斷試劑開發(fā):基于激酶活性的檢測方法學建立。


      常見問題與解答

      Q1:PhosphoSens技術與傳統(tǒng)終點法相比有何優(yōu)勢?

      A:傳統(tǒng)終點法僅能獲取單一時間點數據,而PhosphoSens通過連續(xù)監(jiān)測反應曲線,可精準計算動力學參數(如IC50、Ki),并區(qū)分可逆/不可逆抑制劑。

      Q2:SOX熒光團是否兼容常規(guī)熒光酶標儀?

      A:是的。SOX在485nm激發(fā)/485nm發(fā)射模式下,與主流酶標儀(如FlexStation 3、SpectraMax)兼容。

      Q3:如何解決化合物自身熒光干擾問題?

      A:使用PhosphoSens-Red試劑盒(含Eu3?),通過時間分辨熒光(延遲100秒讀取620nm信號)有效規(guī)避干擾。

      Q4:是否支持高通量篩選(HTS)?

      A:支持。PhosphoSens試劑盒設計適配96孔板,可集成至自動化液體處理系統(tǒng),單板通量達384孔。

      Q5:能否定制特殊突變體底物?

      A:可以。AssayQuant提供定制化多肽合成服務,覆蓋野生型及常見突變體(如EGFR T790M、ALK C1156Y)。

      Q6:樣品處理對檢測結果影響大嗎?

      A:建議使用低濃度ATP(1-2 mM)模擬生理條件,并避免反復凍融。具體方案可參考產品說明書或聯系技術支持。

      Q7:試劑盒的有效期和儲存條件?

      A:多數試劑盒有效期為12個月,需避光儲存于-20℃。凍干粉需復溶后48小時內使用。

      Q8:如何驗證抑制劑的可逆性?

      A:采用“跳躍稀釋法":在高濃度抑制劑(>IC50 25倍)中孵育酶后稀釋,可逆抑制劑活性恢復,不可逆抑制劑活性維持低位。

      Q9:是否提供技術培訓與文獻支持?

      A:是的。AssayQuant提供線上/線下操作培訓,并可分享同類靶點的成功案例及文獻數據。

      Q10:支持哪些物種的激酶檢測?

      A:目前主要覆蓋人類激酶組,部分試劑盒兼容小鼠、大鼠等模式生物,定制服務可擴展至其他物種。


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      BULK - Cysteine Sox Kinase Sensor AQT0101, Peptide Substrate, 1mg net peptide, lyophilized (Lot 011-02V1)

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      ea

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      Ammonium bicarb solution for peptide solubilization

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