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      活細(xì)胞的免疫熒光染色方案

       發(fā)布時(shí)間:2018/7/25 點(diǎn)擊量:2889

      ESI BIO的使命是成為客戶信賴的合作伙伴,將科學(xué)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為診所。我們通過(guò)提供突破性的干細(xì)胞技術(shù)作為研究級(jí)和治療級(jí)產(chǎn)品來(lái)實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),從研究到診所的照明,以幫助我們的客戶實(shí)現(xiàn)他們治療疾病的目標(biāo)。

      ESI BIO建立在豐富的創(chuàng)新和科學(xué)的基礎(chǔ)之上。我們于2000年在新加坡成立了ES Cell International,在那里我們通過(guò)制造個(gè)可翻譯的臨床級(jí)胚胎干細(xì)胞系來(lái)創(chuàng)建歷史,以便分發(fā)給研究界。

       

      ESI BIO現(xiàn)在開展業(yè)務(wù)Alameda CA. 我們是BioTime,Inc。擁有的以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的子公司的驕傲家族的成員,我們從中受益于的科學(xué),知識(shí)產(chǎn)權(quán)和干細(xì)胞技術(shù)的深層來(lái)源。

      抗體

       

      胚胎干細(xì)胞(ESCs)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)的表征是干細(xì)胞研究中的關(guān)鍵步驟。驗(yàn)證起始細(xì)胞群的常規(guī)過(guò)程應(yīng)該簡(jiǎn)單,快速,重要的是可靠,以確保準(zhǔn)確和一致的結(jié)果。ESI BIO為您提供關(guān)鍵抗體形式和活體染色工具,這些工具專為干細(xì)胞直接開發(fā)和測(cè)試而開發(fā)。

      快速而可靠的多能性驗(yàn)證
      ESI BIO的BioLite™抗體可直接染色培養(yǎng)液中的活細(xì)胞,因此無(wú)需犧牲可用于下游實(shí)驗(yàn)的有價(jià)值物質(zhì)。

      · 確認(rèn)多能性標(biāo)志物表達(dá)

      · 允許在染色后繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)

      · 低內(nèi)毒素,不含Sodium azide的配方

      · 無(wú)需固定或透化,僅需孵育30分鐘

       



      圖1. [A]小鼠ES細(xì)胞的IF分析。用BioLite SSEA-1(Dy-Light 488)抗體染色后培養(yǎng)細(xì)胞和相同視野的相差圖。[B] IF重組成人成纖維細(xì)胞第11天的原代iPS細(xì)胞集落的IF分析。用BioLite TRA-1-81(DyLight 488)抗體染色后培養(yǎng)細(xì)胞和相同視野的相差圖。以10X放大率拍攝圖像。

       

      活細(xì)胞的免疫熒光染色方案  見(jiàn)附件

      活細(xì)胞免疫熒光染色

      描述

      本協(xié)議描述了用BiLite™抗體直接免疫熒光(IF)染色活細(xì)胞的方法。所有的步驟都應(yīng)該在無(wú)菌的工作環(huán)境中進(jìn)行。 g新鮮培養(yǎng)基。請(qǐng)注意:

      次使用一種抗體時(shí),建議對(duì)抗體進(jìn)行滴定,以達(dá)到特定于細(xì)胞類型的*性能。

      ·細(xì)胞可以在多孔板中直接生長(zhǎng)、處理和染色。·只需在生物安全柜中打開抗體,以防止可能的污染。

      ·保護(hù)熒光共軛物不受光線照射。所需材料

      所需設(shè)備

      -BioLiteTM抗體(CAT)。否ST11006或貓。否ST11008)

      37°C和5% CO2培養(yǎng)箱

      細(xì)胞培養(yǎng)基

      熒光顯微鏡

      ·多能干細(xì)胞

      實(shí)驗(yàn)協(xié)議

      參考技術(shù)數(shù)據(jù)表中推薦的起始濃度,并滴定一次抗體,以獲得*的細(xì)胞類型性能。

      原抗體在新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基中稀釋至確定的*濃度

      將培養(yǎng)液從細(xì)胞孔中吸出染色,直接將稀釋后的抗體加入活細(xì)胞的培養(yǎng)井中。

      在37℃下用5%CO2孵化器孵育30分鐘。

      吸出一次抗體,用新鮮培養(yǎng)基輕輕沖洗兩次。

      向井內(nèi)加入新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基。

      用熒光顯微鏡和適當(dāng)?shù)臑V鏡檢查細(xì)胞。

      8.將細(xì)胞返回孵化器并繼續(xù)正常培養(yǎng)。

      BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL 

      通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)活的,未固定的多能干細(xì)胞群中的SSEA-1表達(dá)。

       

      ST11006

       

      BioLite™表面標(biāo)記允許對(duì)活的,未固定的多能干細(xì)胞群進(jìn)行直接免疫熒光染色。抗體經(jīng)過(guò)細(xì)致的應(yīng)用測(cè)試和驗(yàn)證,以確保它們是無(wú)菌的,無(wú)毒的,不含Sodium azide,并且不含培養(yǎng)病原體。與未處理的細(xì)胞相比,用BioLite抗體染色的菌落能夠在培養(yǎng)中繼續(xù),對(duì)增殖和分化潛能沒(méi)有不利影響。

      背景技術(shù)階段特異性胚胎抗原-1(SSEA-1)是在早期小鼠胚胎,鼠胚胎癌(EC),鼠胚胎干(ES)和鼠和人胚(EG)細(xì)胞表面上表達(dá)的碳水化合物表位。未分化的人EC和ES細(xì)胞沒(méi)有明顯的免疫反應(yīng)性。人EC的分化導(dǎo)致SSEA-1表達(dá)的增加,而小鼠的表達(dá)減少。SSEA-1與細(xì)胞粘附,遷移和分化有關(guān)。

       

      濃度 0.5毫克/毫升

      物種反應(yīng)性 人類,老鼠

      主辦 小鼠單克隆

      克隆 MC-480

      同型 IgM,κ

      免疫原 F9四角癌干細(xì)胞(X射線照射)

      公式 0.2μm過(guò)濾滅菌的磷酸鹽緩沖溶液,pH 7.2,不含防腐劑。通過(guò)LAL測(cè)試確定,內(nèi)毒素水平<0.1EU /μg蛋白質(zhì)(<0.01ng /μg蛋白質(zhì))。配方不含細(xì)菌,真菌和支原體。

      儲(chǔ)存和穩(wěn)定性 儲(chǔ)存在2-8°C避光。根據(jù)指示存放,自收到之日起6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。

      BioLite格式不含防腐劑,因此必須在無(wú)菌條件下處理。

      應(yīng)用程序測(cè)試 對(duì)活的,未固定的小鼠ES細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光(IF)

      推薦的稀釋液 免疫熒光1:100

      流式細(xì)胞儀1:100

      建議針對(duì)每種應(yīng)用滴定抗體以獲得*性能。

      替代名稱 CD15,階段特異性胚胎抗原1

       

       

      貨號(hào)

      品名

      規(guī)格

      品牌

      ST11006

      BioLite™ SSEA-1 (DyLight 488) anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

      ST11008

      BioLite™ TRA-1-81 (DyLight 488) anti-Human Antibody, 100 μL

       100 μL

      esibio

      ST11023

      Nestin anti-Human Antibody, 100 μL

       100 μL

      esibio

      ST11003

      Oct4 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

       ST11001

      Sox2 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

      ST11013

      SSEA-1 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

       ST11014

      SSEA-3 anti-Human/Mouse Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

      ST11015

      SSEA-4 anti-Human Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

      ST11018

      TRA-1-60 (PE) anti-Human Antibody, 100 μL

       100 μL

      esibio

      ST11016

      TRA-1-60 anti-Human Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

      ST11017

      TRA-1-81 anti-Human Antibody, 100 µL

       100 µL

      esibio

       ES-700

      ESI-017 Human Embryonic Stem Cell Line

      ea

      esibio

      ES-701

      ESI-035 Human Embryonic Stem Cell Line

      ea

      esibio

       ES-702

      ESI-049 Human Embryonic Stem Cell Line

      ea

      esibio

      ES-703

      ESI-051 Human Embryonic Stem Cell Line

      ea

      esibio

      ES-704

      ESI-053 Human Embryonic Stem Cell Line

      ea

      esibio

      ES-706

      Human Embryonic Stem Cell Bundle

      ea

      esibio

       

       

      上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

      1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

      2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營(yíng)超過(guò)700多個(gè)品牌,基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。

      3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。

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      5:多年積累良好的信譽(yù),大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國(guó)藥、fisher等藥企。

      6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。

      7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發(fā),歡迎合作。

       

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