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      cytoskeleton AKL95-B說(shuō)明書

       發(fā)布時(shí)間:2018/8/17 點(diǎn)擊量:578

      Cytoskeleton,Inc。很高興為藥物篩選,信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過(guò)程。我們的試劑盒可用于少量樣品,用于基礎(chǔ)研究或小屏幕(Biochem Kits™),也可用于大屏幕的高通量樣品CytoDYNAMIX Screens™)。

      除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,我們還在產(chǎn)品線中為微管,微管蛋白,運(yùn)動(dòng)蛋白,小G蛋白效應(yīng)物,GAP,GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

       

      結(jié)合蛋白質(zhì)

      · 概述

      · 關(guān)于

      · CITATIONS

      · 常見(jiàn)問(wèn)題解答

       

      測(cè)定所有肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP)以確保其活性與公布的值相當(dāng)。測(cè)定因產(chǎn)品而異,包括F-肌動(dòng)蛋白切斷測(cè)定,F(xiàn)-肌動(dòng)蛋白激活的ATP水解和肌動(dòng)蛋白聚合測(cè)定。顯示了測(cè)量WASP VCA結(jié)構(gòu)域蛋白在肌動(dòng)蛋白聚合中的作用(右)。

       

      Cytoskeleton,Inc。銷售一系列純化的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。所有Cytoskeleton的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白都具有高純度,并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的生物活性測(cè)試。細(xì)胞骨架還為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白研究提供肌動(dòng)蛋白,抗體和試劑盒。

      由Arp2 / 3和WASP VCA結(jié)構(gòu)域刺激的肌動(dòng)蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3(Cat。#RP01)和WASP VCA(Cat。#VCG03)結(jié)構(gòu)域?qū)?dòng)蛋白聚合的影響

      肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用
      *,F(xiàn)-和G-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用(14)??。目前有超過(guò)150種已知的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP),其占細(xì)胞蛋白的約25%。ABP在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上賦予大量功能多樣性,其涉及諸如肌肉收縮,唇形突破,細(xì)胞運(yùn)動(dòng),胞質(zhì)分裂和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的過(guò)程。研究這些過(guò)程如何調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲功能和動(dòng)力學(xué)是一個(gè)重要且不斷增長(zhǎng)的研究領(lǐng)域。

      可以通過(guò)使用生物化學(xué),遺傳學(xué)和免疫學(xué)方法分離和研究肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。因?yàn)榇嬖诔^(guò)50種類型的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的。肌動(dòng)蛋白親和柱通常用于親和純化ABP,無(wú)論它們是F-或G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合。可以通過(guò)利用芘肌動(dòng)蛋白熒光的聚合增強(qiáng)來(lái)進(jìn)行顯示潛在ABP影響肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)的簡(jiǎn)單測(cè)定(參見(jiàn)測(cè)量肌動(dòng)蛋白聚合物部分)。這種性質(zhì)的研究有助于鑒定新的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。有幾篇值得一讀的關(guān)于識(shí)別和量化新肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的可能方法的評(píng)論(15,16,17)?

      問(wèn)題1:哪種肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(ABP)可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合對(duì)照? 

      答案1:肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白α-輔肌動(dòng)蛋白(Cat。#AT01)是一種F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合和交聯(lián)蛋白,使其可用作F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合研究的對(duì)照。它的Kd是1μM,這意味著在該濃度下發(fā)生50%結(jié)合。因此,我們的目標(biāo)是使用 2μM的α-肌動(dòng)蛋白作為結(jié)合測(cè)定中的陽(yáng)性對(duì)照。在結(jié)合反應(yīng)中,2μM濃度的α-輔肌動(dòng)蛋白相當(dāng)于0.23μg/μl。此外,α-輔肌動(dòng)蛋白對(duì)pH敏感,其高親和力發(fā)生在pH 7.0。

       

      問(wèn)題2:Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動(dòng)蛋白活力? 

      答案2:遺憾的是,我們不會(huì)出售運(yùn)動(dòng)級(jí)肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制測(cè)試非常難以復(fù)制,因此我們無(wú)法充分確保試劑的質(zhì)量。因此,肌球蛋白(Cat。#MY02MY03)和重型meromyosin蛋白(Cat。#MH01)不推薦用于F-肌動(dòng)蛋白運(yùn)動(dòng)測(cè)定。已經(jīng)測(cè)試過(guò)這些試劑的客戶在運(yùn)動(dòng)方面沒(méi)有取得很好的成功,因此我們不建議購(gòu)買樣品進(jìn)行測(cè)試。如果需要運(yùn)動(dòng)級(jí)肌動(dòng)蛋白或重型meromyosin,我們建議遵循原始方案(Kron和Spudich,1985)并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩(wěn)定性。

          參考文獻(xiàn):  SJ Kron和JA Spudich,1985年。熒光肌動(dòng)蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動(dòng)。PNAS,83,6272-6276。

       

      結(jié)合蛋白質(zhì)系列產(chǎn)品:

       

      PHDG1

      Acti-stain 488 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDH1

      Acti-stain 555 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDN1

      Acti-stain 670 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      BK001

      Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      BK003

      Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      AKL95

      Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AD99

      Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

      ea

      cytoskeleton

      AS99

      Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKL99

      Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKF99

      Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AP05

      Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      PHDG2

      Acti-stain 488 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDH2

      Acti-stain 555 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDN2

      Acti-stain 670 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      BK005

      Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      BK007

      Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      AKL96

      Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AD100

      Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle

      ea

      cytoskeleton

      AS100

      Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKL100

      Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKF100

      Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AP06

      Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      PHDG3

      Acti-stain 488 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDH3

      Acti-stain 555 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDN3

      Acti-stain 670 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      BK009

      Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      BK011

      Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      AKL97

      Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AD101

      Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle

      ea

      cytoskeleton

      AS101

      Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle

      ea

      cytoskeleton

       

      肌動(dòng)蛋白(純度> 95%):兔骨骼肌

      Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

       

      1x1毫克(Cat。#AKL95-B)

      5x1 mg(Cat。#AKL95-C)

      產(chǎn)品用途包括

      · 肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的鑒定和表征

      · 體外肌動(dòng)蛋白聚合研究

      · Western印跡分析的抗體標(biāo)準(zhǔn)


      從兔骨骼肌中純化出肌動(dòng)蛋白材料。 AKL99肌動(dòng)蛋白純度大于99%,AKL95純度大于95%。肌肉肌動(dòng)蛋白的分子量約為43kDa。兔肌肉肌動(dòng)蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質(zhì)在4℃下干燥至<10%濕度時(shí)保存6個(gè)月。當(dāng)再 在蒸餾水中構(gòu)成為10毫克/毫升,該蛋白質(zhì)是在以下緩沖液:5mM的的Tris-HCl pH 8.0中,0.2毫米氯化鈣2,0.2mM的ATP,5%蔗糖和1%的葡聚糖。

      純度
      通過(guò)在12%聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測(cè)定法測(cè)定純度。AKL99由> 99%純肌肉肌動(dòng)蛋白組成,而AKL95純度> 95%(見(jiàn)圖1)。

       

       

       


      圖1:圖1.兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白的純度。在SDS-PAGE凝膠上運(yùn)行100μg> 99%純(AKL99)和> 95%純(AKL95)兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白,并用考馬斯藍(lán)染色。箭頭表示肌動(dòng)蛋白,箭頭表示α-肌動(dòng)蛋白污染物(115kDa)。純化的肌動(dòng)蛋白中的微量雜質(zhì)主要是肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,例如α-肌動(dòng)蛋白和凝溶膠蛋白。

       

      生物活性
      肌肉肌動(dòng)蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長(zhǎng)絲(F-肌動(dòng)蛋白)的能力和在旋轉(zhuǎn)分析中與未聚合組分分離的能力決定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保AKL99產(chǎn)生> 90%的F-肌動(dòng)蛋白,AKL95在該測(cè)定中產(chǎn)生> 80%的F-肌動(dòng)蛋白。

       

      問(wèn)題1:儲(chǔ)存肌動(dòng)蛋白的*方法是什么,以確保大的穩(wěn)定性和保質(zhì)期?

      答案1:   細(xì)胞骨架提供我們所有的肌動(dòng)蛋白作為凍干粉末,以便它們可以在室溫下運(yùn)輸。收到后,凍干粉末應(yīng)在4℃下儲(chǔ)存在帶有干燥劑的密封容器中。重要的是監(jiān)測(cè)干燥劑的新鮮度并確保其繼續(xù)吸收水分以保護(hù)凍干的肌動(dòng)蛋白。妥善儲(chǔ)存后,凍干肌動(dòng)蛋白保證自購(gòu)買之日起6個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。或者,肌動(dòng)蛋白可立即以推薦的濃度重新懸浮,等分,在液氮中快速冷凍并儲(chǔ)存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩(wěn)定6個(gè)月。解凍冷凍等分試樣時(shí),重要的是在室溫水浴中解凍。

       

      問(wèn)題2:聚合后儲(chǔ)存F-肌動(dòng)蛋白的*方法是什么?

      答案2:   G-肌動(dòng)蛋白在4°C下穩(wěn)定2天,需要二價(jià)陽(yáng)離子,pH 6.5 - 8.0和ATP穩(wěn)定性。F-肌動(dòng)蛋白是穩(wěn)定的,可以在4°C下儲(chǔ)存1-2周。F-肌動(dòng)蛋白需要ATP(0.2mM)和Mg2 +(2mM)的穩(wěn)定性,并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩(wěn)定的。F-肌動(dòng)蛋白對(duì)冷凍不穩(wěn)定。F-肌動(dòng)蛋白可以轉(zhuǎn)移到各種緩沖液(例如HEPES,磷酸鹽等)而沒(méi)有不利影響。我們建議在4°C下儲(chǔ)存F-肌動(dòng)蛋白時(shí),添加抗菌劑,如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素。

       

      Mohammad等,2012。Flightless I是一種粘附相關(guān)的肌動(dòng)蛋白加帽蛋白,可調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移。FASEB?。doi:10.1096 / fj.11-202051。

      Reay等,2012。核因子κB抑制對(duì)血清型9腺相關(guān)病毒(AAV9)微小肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白基因轉(zhuǎn)移至mdx小鼠的影響。摩爾。醫(yī)學(xué)。v 18 pp 466-476。

      Windhorst等,2011。肌醇-1,4,5-三磷酸-3-激酶-A對(duì)惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的功能作用。詮釋。J.癌癥。第129卷,第1300-1309頁(yè)。

      Arora等,2004。凝溶膠蛋白通過(guò)rac依賴性步驟介導(dǎo)膠原蛋白吞噬作用。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞。第15卷,第588-599頁(yè)。

      Ishikawa等,2004。來(lái)自低溫電子顯微鏡的棘阿米巴肌球蛋白IC尾的子域組織。PROC。國(guó)家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國(guó)。第101卷,第12189-12194頁(yè)。

      Balcer等,2003。通過(guò)高分子量Srv2 / CAP復(fù)合物,cofilin,profilin和Aip1協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白絲轉(zhuǎn)換。CURR。生物。第13卷,第2159-2169頁(yè)。

      Loomis等,2003.Espin交聯(lián)導(dǎo)致體內(nèi)微絨毛型平行肌動(dòng)蛋白束的延長(zhǎng)。J. Cell Biol。第163卷,第1045-1055頁(yè)。

      Upadhyaya等,2003。通過(guò)使用肌動(dòng)蛋白推進(jìn)的脂質(zhì)囊泡探測(cè)聚合力。PROC。國(guó)家科。科學(xué)院。科學(xué)。美國(guó)。第100卷,第4521-4526頁(yè)。

      Humphries等,2002。通過(guò)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白冠狀蛋白直接調(diào)節(jié)Arp2 / 3復(fù)合物的活性和功能。J. Cell Biol。第159卷,第993-1004頁(yè)。

      Sagot等,2002。由Bni1和profilin介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白成核機(jī)制。納特。細(xì)胞生物學(xué)。第4卷,第626-631頁(yè)。

      Engqvist-Goldstein等,2001。肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Hip1R在胞吞作用的早期階段與網(wǎng)格蛋白結(jié)合并在體外促進(jìn)網(wǎng)格蛋白裝配。J. Cell Biol。第154號(hào),第1209-1223頁(yè)。

       

       

      貨號(hào)

      品名

      規(guī)格

      品牌

      BK165-S

      Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

      (10 assay)

      cytoskeleton

      BK165

      Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit

      (30 assay)

      cytoskeleton

      BK163-S

      Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

      (10 assay)

      cytoskeleton

      BK163

      Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit

      (30 assay)

      cytoskeleton

      BK160-S

      Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

      (10 assay)

      cytoskeleton

      BK160

      Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit

      (30 assay)

      cytoskeleton

      BK162-S

      Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

      (10 assay)

      cytoskeleton

      BK162

      Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit

      (30 assay)

      cytoskeleton

      BK161-S

      Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

      (10 assay)

      cytoskeleton

      BK161

      Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit

      (30 assay)

      cytoskeleton

      AAC04-Beads

      Acetyl-Lysine Affinity Beads

      ea

      cytoskeleton

      APY03-Beads

      Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads

      ea

      cytoskeleton

      ASM11-Beads

      SUMOylation 1 Affinity Beads

      ea

      cytoskeleton

      ASM24-Beads

      SUMOylation 2/3 Affinity Beads

      ea

      cytoskeleton

      UBA01-Beads

      Ubiquitination Affinity Beads

      ea

      cytoskeleton

      CIG02-Beads

      Acetyl-Lysine Control Beads

      ea

      cytoskeleton

      CIG03-Beads

      SUMO1 IP Control Beads

      ea

      cytoskeleton

      CIG01-Beads

      IgG Control Beads

      ea

      cytoskeleton

      CUB02-Beads

      Ubiquitination Control Beads

      ea

      cytoskeleton

      BLR01

      BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit

      ea

      cytoskeleton

      BLR02

      BlastR™ Rapid Filtration Kit

      ea

      cytoskeleton

      AAC02

      Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)

      ea

      cytoskeleton

      AAC03

      Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

      ea

      cytoskeleton

      AAC03-HRP

      Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)

      ea

      cytoskeleton

      AAC01

      Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)

      ea

      cytoskeleton

      APY03

      Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

      ea

      cytoskeleton

      APY03-HRP

      Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)

      ea

      cytoskeleton

      ASM01

      SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)

      ea

      cytoskeleton

      ASM24

      SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)

      ea

      cytoskeleton

      ASM23

      SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

      ea

      cytoskeleton

      ASM23-HRP

      SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)

      ea

      cytoskeleton

      AUB01

      Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal

      ea

      cytoskeleton

      AUB01-HRP

      Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal

      ea

      cytoskeleton

      PHDG1

      Acti-stain 488 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDH1

      Acti-stain 555 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      PHDN1

      Acti-stain 670 phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      BK001

      Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      BK003

      Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin

      ea

      cytoskeleton

      AKL95

      Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AD99

      Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle

      ea

      cytoskeleton

      AS99

      Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKL99

      Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AKF99

      Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AP05

      Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      APHR

      Actin protein (rhodamine): human platelet

      ea

      cytoskeleton

      AR05

      Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      AT01

      Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      RP01P

      Arp2/3 protein complex: porcine brain

      ea

      cytoskeleton

      CS-TFC01

      Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)

      ea

      cytoskeleton

      CF01

      Cofilin 1 protein: human recombinant

      ea

      cytoskeleton

      HPG6

      Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant

      ea

      cytoskeleton

      MH01

      Heavy meromyosin protein

      ea

      cytoskeleton

      CS-MH03

      Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)

      ea

      cytoskeleton

      CS-MYS03

      Myosin - cardiac S1 fragment

      ea

      cytoskeleton

      CS-MYS04

      Myosin - skeletal muscle S1 fragment

      ea

      cytoskeleton

      CS-MYS05

      Myosin - smooth muscle S1 fragment

      ea

      cytoskeleton

      MY02

      Myosin II protein: rabbit skeletal muscle

      ea

      cytoskeleton

      MY03

      Myosin protein: bovine cardiac muscle

      ea

      cytoskeleton

      PR02

      Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant

      ea

      cytoskeleton

      PHDR1

      Rhodamine Phalloidin

      ea

      cytoskeleton

      CY-SC001

      SiR-Actin Kit

      ea

      cytoskeleton

      CY-SC013

      SiR700-Actin Kit

      ea

      cytoskeleton

      VCG03

      WASP protein VCA domain: GST tagged: human

      ea

      cytoskeleton

       

       

       

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