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      使用PNA miRNA抑制劑的方案

       發(fā)布時間:2018/9/5 點(diǎn)擊量:747

      PNA BIO INC致力于為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用領(lǐng)域的實驗室提供的研究產(chǎn)品和服務(wù)。

      PNA Bio提供PNA(Peptide Nucleic Acid)產(chǎn)品,包括定制寡核苷酸,F(xiàn)ISH探針,miRNA抑制劑,PNA鉗夾探針和Fmoc單體。HPLC純化后,它們與MS / MS數(shù)據(jù)一起提供> 95%的純度。PNA產(chǎn)品由Panagene制造。

      PNA Bio還提供工程化核酸酶服務(wù),包括CRISPR / Cas9核酸酶(RGEN)合成,驗證和Cas9蛋白以及敲除和敲入細(xì)胞系服務(wù)。

      PNATM miRNA抑制劑   PNA miRNA Inhibitors

      由于PNA比DNA或RNA更強(qiáng)地結(jié)合互補(bǔ)RNA,因此相對于基于RNA / DNA的miRNA抑制劑,它提供了更高的活性。此外,PNA miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽(CPP)結(jié)合,使其無需轉(zhuǎn)染試劑即可進(jìn)入細(xì)胞。
      已經(jīng)顯示PNA miRNA抑制劑的使用是體內(nèi)有價值的工具。

      主要特征

       PNAs™miRNA抑制劑具有高度序列特異性

       

       可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

       

       可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

       

       PNAs™miRNA抑制劑在細(xì)胞中具有長的半衰期,長達(dá)14天

       

       PNAs™miRNA抑制劑具有抗性和非常穩(wěn)定的細(xì)胞核酸酶

       

       PNAs™miRNA抑制劑沒有細(xì)胞毒性

      目錄號

      描述

      尺寸

      PI - XXXX - 10

      PNAs™miRNA抑制劑

      10納摩爾

      PI - XXXX - 25

      PNAs™miRNA抑制劑

      25納摩爾

      PN - 1001 - 10

      PNAs™miRNA抑制劑陰性對照

      10納摩爾

      PN - 1001 - 25

      PNAs™miRNA抑制劑陰性對照

      25納摩爾

      PI - XXXX - FAM

      PNAs™miRNA抑制劑

      5納摩爾

      PN - 1001 - FAM

      PNAs™FAM - 標(biāo)記為陰性對照

      5納摩爾

       

      使用PNA miRNA抑制劑的方案

       

      PNATM miRNA抑制劑是針對成熟形式的miRNA而設(shè)計的。由于pna相對于dna具有較好的親和力和特異性,是一種理想的分子生物學(xué)工具。 證明miRNA作為一種抗感試劑的作用。

       

      我們的PNATM miRNA抑制劑與細(xì)胞穿透肽結(jié)合,只需將其添加到培養(yǎng)基中即可進(jìn)入細(xì)胞。使用轉(zhuǎn)染試劑可促進(jìn)穿透。 miRNA抑制劑進(jìn)入細(xì)胞。一般情況下,4~6小時后,細(xì)胞內(nèi)可見PNA miRNA抑制劑。大效應(yīng)出現(xiàn)在24~48小時之間。因為PNA對核酸酶和Pr都有抗性 抑制作用持續(xù)一周以上。

       

       

      PNA miRNA抑制劑的治療

       

      細(xì)胞電鍍

       

      1.轉(zhuǎn)染前1d,種子5.0×104細(xì)胞在0.5ml中接種24孔板,1.5×105細(xì)胞在1.5ml中接種6孔板,在合適的*培養(yǎng)基中不加抗生素。

       

      在一夜之間培養(yǎng)細(xì)胞

       

      PNA miRNA抑制劑的制備

       

      順著含有miRNA抑制劑的管子旋轉(zhuǎn)。

       

      在125升UL水溶液中,用50μL水或25毫摩爾回流10毫摩爾管,制成200μm原料。如果不*溶解,在60℃加熱5min。

       

      商店里-70華氏度。

       

      • PNA miRNA抑制劑如果保存得當(dāng),其溶液應(yīng)穩(wěn)定在1年以上。

       

       

      miRNA抑制劑的治療

       

      (選項)將每口井的培養(yǎng)基替換為優(yōu)選培養(yǎng)基,如OPTIMEM或*不含抗生素的培養(yǎng)基。

       

      在60℃下加熱PNA miRNA抑制劑10 min。

       

      在OPTI-MEM中制備miRNA抑制劑混合物,用或不加轉(zhuǎn)染試劑孵育15 min。

       

      *在有轉(zhuǎn)染試劑的情況下,miRNA抑制劑的推薦濃度為0.2~0.5μm(每200 ul培養(yǎng)基0.5ul),或1~2μm未轉(zhuǎn)染試劑。

       

      向細(xì)胞中加入miRNA混合物。

       

      細(xì)胞孵育48小時。

       

      *宜條件將由用戶根據(jù)經(jīng)驗確定。

      • 實時PCR評價

       

      • 從培養(yǎng)的細(xì)胞中去除生長培養(yǎng)基。

       

      • 根據(jù)制造商的指示,分別使用PureLink™RNA試劑盒或miRNA分離試劑盒(LifeTechnologies)從樣品中提取總RNA或miRNA。

       

      • **不使用TrIZOL進(jìn)行總RNA提取,因為PNA-miRNA復(fù)合物被TrIZOL解離。

       

      • 三。使用TaqMan®microRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Apple BioSosits)進(jìn)行10 ng總RNA或miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。TaqMan®Unvior的實時PCR反應(yīng) AL PCR碩士混合(應(yīng)用生物系統(tǒng))根據(jù)制造商的指示。

       

      參考

      Oh SY et al. (2010) PNA-based antisense oligonucleotides for micrornas inhibition in the absence of a transfection reagent. Oligonucleotides 20(5):225-30.

       

      Fabbri E et al. (2011) Modulation of the Biological Activity of microRNA-210 with Peptide Nucleic Acids (PNAs). Chem Med Chem 6(12):2192-2202.

       

      Jiang L et al. (2011) Identification and experimental validation of G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2(GNAI2) as a microRNA-138 target in tongue squamous cell carcinoma. Hum Genet 129(2):189-97

       

      Gaglione M et al. (2011) PNA-based artificial nucleases as antisense and antimiRNA oligonucleotide agents. Mol Biosyst 7(8):2490-9

       

       

      Pnabio 部分產(chǎn)品列表

      貨號

      品名

      規(guī)格

      品牌

      CP01-20

      Reconstitutes to 1 mg/ml, 120 pmol (6 uM x 20 ul)

      20 ug

      pnabio

      CP01-50

      Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)

      50 ug

      pnabio

      CP01-200

      Reconstitutes to 1 mg/ml, 1200 pmol (6 uM x 200 ul)

      200 ug (50 ug x 4)

      pnabio

      CP02

      Reconstitutes to 5 mg/ml, 1530 pmol (30 uM x 50 ul)

      250 ug

      pnabio

      CP03

      Reconstitutes to 5 mg/ml, 6000 pmol (30 uM x 50 ul x 4 tubes)

      1 mg (250 ug x 4)

      pnabio

      CP04-100

      Liquid form 1 mg/ml, 600 pmol (6 uM x 20 ul x 5 tubes)

      100 ug (20 ug x 5)

      pnabio

      CP04-500

      Liquid form 5 mg/ml, 3000 pmol (30 uM x 20 ul x 5 tubes)

      500 ug (100 ug x 5)

      pnabio

      CN01

      Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)

      50 ug

      pnabio

      CN02

      Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)

      250 ug

      pnabio

      CD01

      Reconstitutes to 1 mg/ml,  300 pmol (6 uM x 50 ul)

      50 ug

      pnabio

      CD02

      Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)

      250 ug

      pnabio

      F1001

      C-rich telomere probe, FAM labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1002

      C-rich telomere probe, Cy3 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1003

      C-rich telomere probe,  Cy5 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1004

      C-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1005

      G-rich telomere probe, FAM labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1006

      G-rich telomere probe, Cy3 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1007

      G-rich telomere probe, Cy5 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1008

      G-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1009

      C-rich telomere probe, FITC labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1010

      G-rich telomere probe, FITC labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1013

         C-rich telomere probe,     Alexa Fluor 647 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1014

         G-rich telomere probe,   Alexa Fluor 647 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F1020

      TelC probe for arthropods, Alexa Fluor 488 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F2001

      C-rich telomere probe, Biotin labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3001

      Centromere probe, FAM labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3002

      Centromere probe, Cy3 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3005

      Centromere probe, Cy5 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3004

      Centromere probe, Alexa Fluor 488 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3008

      Centromere probe, Biotin labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3003

      Centromere probe, Cy3 labeled

      5 nmole

      pnabio

      F3006

      Centromere probe, FAM labeled

      5 nmole

      pnabio

      F5001

      CAG repeats, Cy3 labeled

      5 nmole

      pnabio

      G2001-3

      A set of 4 PNA oligos against human globin,

      3 nmole

      pnabio

      G2001-10

      A set of 4 PNA oligos against human globin

      10 nmole

      pnabio

      MP01-25

      ggcaagtgttcttcgga

      25 nmole

      pnabio

      MP01-50

      ggcaagtgttcttcgga

      50 nmole

      pnabio

      PP01-25

      ggctcaaccctggacag

      25 nmole

      pnabio

      PP01-50

      ggctcaaccctggacag

      50 nmole

      pnabio

      RV01

      Surrogate reporter vector with GFP for FACS

      5 ug

      pnabio

      RV02

      Surrogate reporter vector with GFP and H2KK for MACS

      5 ug

      pnabio

      RV03

      Surrogate reporter vector with GFP and Hygromycin-R

      5 ug

      pnabio

      CV01

      Cas9 co-transfection vector (CMV promoter)

      5 ug

      pnabio

      CV02

      Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (CMV promoter)

      5 ug

      pnabio

      CV03

      Cas9, RFP, puromycin R expression vector (CMV promoter)

      5 ug

      pnabio

      CV11

      Cas9 co-expression vector (EF1a promoter)

      5 ug

      pnabio

      CV12

      Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (EF1a promoter)

      5 ug

      pnabio

      CV13

      Cas9, RFP, and Puromycin R expression vector (EF1a promoter)

      5 ug

      pnabio

      FMA-1001

      Fmoc-A(Bhoc)-aeg-OH

      1 g / 2 g

      pnabio

      FMG-1001

      Fmoc-G(Bhoc)-aeg-OH

      1 g / 2 g

      pnabio

      FMC-1001

      Fmoc-C(Bhoc)-aeg-OH

      1 g / 2 g

      pnabio

      FMT-1001

      Fmoc-T-aeg-OH

      1 g / 2 g

      pnabio

      FMO-1001

      Fmoc-AEEA-OH

      1 g / 2 g

      pnabio

      PNAC-1002

      PNAClamp KRAS Kit (v2)

      30 tests

      pnabio

      PNAC-1003

      PNAClamp KRAS Kit (v3)

      25 tests

      pnabio

      PNAC-1004

      PNAClamp KRAS Kit (plus)

      25 tests

      pnabio

      PNAC-1006

      PNAClamp KRAS Kit (v4)

      25 tests

      pnabio

      PNAC-1101

      PNAClamp NRAS Kit (v4)

      25 tests

      pnabio

      PNAC-2001

      PNAClamp BRAF Kit

      50 tests

      pnabio

      PNAC-3002

      PNAClamp EGFR Kit

      25 tests

      pnabio

      PNAC-4002

      PNAClamp PIK3CA Kit

      25 tests

      pnabio

      PNAC-5001

      PNAClamp IDH1 Kit

      25 tests

      pnabio

       

       

       

      上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

      1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

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      7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。

       

       

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