ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。
ALSTEM VP200說(shuō)明書(shū)
Retroviral Packaging Mix: #VP200
描述
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物提供了一種快速方便的方法，用于產(chǎn)生高滴度的無(wú)復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這種基于Moloney鼠白血病病毒（MMLV）的包裝系統(tǒng)擁有您的靶細(xì)胞所需的理想宿主范圍。它是一種即用型逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物，含有VSVG，僅需48小時(shí)即可產(chǎn)生高滴度的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這些必需的病毒結(jié)構(gòu)基因的單獨(dú)表達(dá)通過(guò)小化細(xì)胞分裂過(guò)程中產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)并降低產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒的機(jī)會(huì)來(lái)確保對(duì)重組構(gòu)建體的安全性和控制。
產(chǎn)品規(guī)格 | |
產(chǎn)品名稱 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物 |
目錄 ＃ | VP200 |
尺寸 | 200μl |
運(yùn)輸 | 環(huán)境溫度 |
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性 | 儲(chǔ)存在-20°C。根據(jù)指示儲(chǔ)存，本產(chǎn)品可穩(wěn)定保存6個(gè)月。應(yīng)通過(guò)分成一次性等分試樣來(lái)小化凍融循環(huán)。將等分試樣儲(chǔ)存在-20°C冰箱中直至準(zhǔn)備使用。 |
質(zhì)量控制 | 每批逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物在使用人胚胎腎293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染測(cè)定中進(jìn)行功能測(cè)試。 |
安全須知 | 對(duì)于含有BSL-2生物的所有材料，請(qǐng)遵循推薦的NIH指南。始終戴上手套，使用過(guò)濾的吸頭并在生物安全罩下工作。 |
限制使用 | 僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。 |
用法 | 對(duì)于10厘米的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝，將7.5微克逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體與15微升逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物混合 |
協(xié)議 | 下載 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物是用于產(chǎn)生高滴度泛熱反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)化配方。
條件 | 數(shù)量 |
組織培養(yǎng)板大小 | 10厘米（每個(gè)慢病毒載體一個(gè)） |
要轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞數(shù) | 4×10 6個(gè)細(xì)胞 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物的量 | 15μl |
pRetro表達(dá)載體的量 | 7.5微克 |
NanoFect的數(shù)量（Cat.no. NF100） | 45μl |
無(wú)血清DMEM的量 | 500μl |
第1天：
1.在10cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)293T細(xì)胞（每10cm培養(yǎng)皿約4×10 6個(gè)細(xì)胞）。
第2天：
2.檢查以確保細(xì)胞達(dá)到70-80％匯合。
3.對(duì)于每個(gè)10cm培養(yǎng)皿，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染復(fù)合物如下：
一個(gè)。1.5ml試管A：在0.5ml無(wú)血清培養(yǎng)基（例如DMEM）中稀釋7.5μgDNA質(zhì)粒和15μl逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物。通過(guò)移液混合。
灣 1.5ml離心管中B：稀釋NanoFect的45μL TM轉(zhuǎn)染試劑在0.5ml無(wú)血清培養(yǎng)基中并輕輕混合。
C。將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過(guò)渦旋混合5-10秒，然后在室溫下孵育DMEM-質(zhì)粒-NanoFect混合物15分鐘。
4.將來(lái)自步驟3的完整轉(zhuǎn)染復(fù)合物逐滴添加至細(xì)胞，并旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿以將轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻地分散在平板中。
5.將板在37°C孵育過(guò)夜。
第3天：
6.用10ml新鮮培養(yǎng)基更換上清液。
注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號(hào)VB100）補(bǔ)充培養(yǎng)基，以提高病毒滴度。
7.在37°C孵育24小時(shí)。
第4天（1 ST收獲）：
8.將含有逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清液收集到50ml無(wú)菌帶蓋的錐形離心管中。
9.在4℃下以3000rpm離心上清液15分鐘以沉淀細(xì)胞碎片。
10.通過(guò)低蛋白結(jié)合0.45-μm無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾澄清的上清液。
11.病毒已準(zhǔn)備好進(jìn)行感染，純化，或者可以在-80°C下作為病毒原液儲(chǔ)存，以備將來(lái)使用。等分體積優(yōu)選用于儲(chǔ)存以降低凍融循環(huán)中的病毒滴度損失。
12.如果需要第二次收獲，在次收獲后向細(xì)胞中加入10ml*培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)皿放回37℃培養(yǎng)箱中。
注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號(hào)VB100）補(bǔ)充培養(yǎng)基，以提高病毒滴度。
第5天（第二次收獲）
13.第二次收獲可在第5天完成，步驟8-11之后。
14.為了濃縮病毒，將1體積的逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮溶液（ALSTEM，cat.no.VC200）加入到4體積的病毒上清液中，并充分混合。
15.將混合物置于4°C冰箱中過(guò)夜，第二天將病毒沉淀。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱用戶手冊(cè)。
| 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
| VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
| VC100 | 慢病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| V020 | TransPlus™病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑 | 100μl/500μl | alstembio |
| CILV02 | hTERT細(xì)胞永生化試劑盒 | 5 x20μl | alstembio |
| VC200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| VP100 | 慢病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
| VP200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商
1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。
2：產(chǎn)品種類(lèi)齊全，經(jīng)營(yíng)超過(guò)700多品牌，基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。
3：提供加急服務(wù)，貨品一般1-2周到貨。
4：富有競(jìng)爭(zhēng)良好的信譽(yù)，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國(guó)藥、fisher等知藥企。
6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。
7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。
